飼料液相色譜儀硅膠色譜柱在清洗時(shí),強溶劑洗不掉色譜柱上殘留的污染物。然后需要使用更強的溶劑或多種溶劑來(lái)清洗色譜柱。一般來(lái)說(shuō),所有的清潔方法都有相似的模式,使用的溶劑隨著(zhù)溶劑強度的增加而增加,后一種溶劑通常是非常疏水的(如乙酸乙酯),可用于溶解非極性物質(zhì),如脂類(lèi)和油脂。使用多種溶劑時(shí),確保每種溶劑都可以與下一種溶劑混溶。在清洗過(guò)程結束時(shí),必須使用中等強度的可混溶溶劑返回原始溶劑系統。
以下溶劑可用于硅膠鍵合柱常用的緩沖溶液:
100%甲醇、100%乙腈、75%乙腈-25%異丙醇、100%異丙醇、100%二氯甲烷和100%正己烷。
使用二氯甲烷或正己烷后,因為在使用原始水相溶劑之前必須用異丙醇清洗溶劑相容的色譜柱,所以每種溶劑應清洗至少10倍的色譜柱體積。
要恢復原始溶劑系統,不必沖洗每一步,中間步驟可以跳過(guò)。在中間步驟中,可以使用異丙醇,然后使用無(wú)緩沖液的流動(dòng)相,最后恢復初始流動(dòng)相配置。四氫呋喃是常用的另一種去除污染的溶劑。如果色譜柱被嚴重污染,二甲基亞砜或二甲基甲酰銨和水可以以50∶50的比例混合,并以低于0.5ml/min的流速流過(guò)色譜柱反相柱的成功再生是一個(gè)非常耗時(shí)的過(guò)程,并且溶劑洗滌可以通過(guò)梯度洗脫系統操作。另一個(gè)問(wèn)題是色譜柱在清洗過(guò)程中是否會(huì )被反沖,因為大部分強烈保留的污染物會(huì )積聚在色譜柱頭上,這反過(guò)來(lái)會(huì )縮短被沖出色譜柱的污染物的移動(dòng)距離??紤]到填充柱的穩定性,大多數液相色譜柱的填充壓力遠遠高于正常操作壓力,因此它們的床層不應受到反向流速的影響。然而,如果頭部的燒結直徑大于尾部的燒結直徑例如,尾部燒結的孔徑為2μm,這通??梢员3痔盍系钠骄讖綖?μm。如果孔徑大于填充粒度分布曲線(xiàn)的最小粒度,一些填料會(huì )通過(guò)這些間隙流出色譜柱,這將導致空白空間。
清洗飼料液相色譜儀色譜柱的頻率主要取決于有多少強殘留物質(zhì)流過(guò)色譜柱,因為反相色譜柱有時(shí)會(huì )在分辨率消失或重影峰出現之前承受大量污染,用戶(hù)通常會(huì )等到異常情況出現后才開(kāi)始注意。然而,污染物的過(guò)度積累會(huì )使清洗色譜柱更加困難。因此,當經(jīng)常裝載雜質(zhì)較多的樣品時(shí),應定期清洗色譜柱。